免疫组化中抗体的挑选要求!!

1、一抗挑选关键

（1）挑选单克隆仍是多克隆抗体。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体，单克隆抗体能方针明确地与单一特异抗原决议簇结合。另一方面，即使是同一个抗原决议簇，在机体内也能够由好几种克隆产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对较低；而多克隆抗体特异性稍弱，抗体的亲和力强，灵敏度高，但易呈现非特异性染色（能够通过关闭等有所防止）。

（2）种属来历。一般家兔来历的抗体多是多克隆；而小鼠来历的抗体多是单克隆，但也有另外。这条主要要与后边的二抗来历相匹配。

（3）试验目的是检测什么种属的抗原，即species reactivity。这一点很重要，一般阐明书上都有注明，如小鼠Ms、大鼠Rat、人Hum等等。

（4）能否做免疫组化。一般一抗阐明书都会注明做WB、IHC、ICC、IF等，主张zui好挑选注明的抗体，由于一般都是经过文章证明。

（5）检测标本类型。用于检测白腊切片仍是冰冻切片，一般能做白腊切片的抗体，或许都能够用来检测冰冻切片，但能做冰冻切片的抗体，纷歧定能检测白腊切片中的抗原。

（6）生产厂家。国外抗体生产商原装抗体质量一般没问题，但有点贵；而国内分装厂家用的一抗工作液，价格便宜，但有时成果的稳定性和重复性稍差，尤其不同批次重复性较差。

（7）价格与质量的对立。一抗原装质量或许会好点，由于许多一抗防止重复冻融，且在稀释液中稳定性较差（若时间长），但价格较贵。


2、二抗挑选关键

（1）种属来历。主要根据一抗种属来历来决议购买二抗来历，如一抗是小鼠来历，那二抗就买抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。

（2）符号物的挑选。有HRP、Biotin、荧光素等符号物。一般SP三步法二抗挑选Biotin符号的二抗，以与后边的SP结合反应；而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素符号的二抗，如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。这主要与后边有无三抗和三抗种类有关。

（3）挑选IgM仍是IgG。一般一抗是IgM，那么二抗就挑选IgM；反之，一抗是IgG，则二抗挑选IgG。