晶抗解析：传代细胞培育具体说明书

体外培育的原代细胞或细胞株要在体外持续地培育就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到很多的同种细胞，并维持细胞种的连续。培育的细胞形成单层集合今后，由于密度过大生存空间缺乏而引起养分枯竭，将培育的细胞分散，从容器中取出，以1:2 或l:3 以上的比率搬运到另外的容器中进行培育，即为传代培育。 

细胞“一代”指从细胞接种到别离再培育的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞培增3～6 次。

细胞传代后，一般通过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。常用细胞割裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的割裂相数／100 个细胞。一般细胞割裂指数介于0.2％～0.5％，肿瘤细胞可达3～5％。 

细胞接种2～3 天割裂增殖旺盛，是生机的好时期，称指数增生期(对数成长期)，适合进行各种试验。

一：传代细胞培育简介

广义的传代细胞培育一般包括复苏、换液、传代、冻存四个环节，是基本、常用的细胞培育技能。

传代培育是使用培育细胞进行各种试验的必通进程，同时也是一种将细胞种保存下去的办法，广泛应用于生命科学基础研究和生物医药产业。狭义的传代细胞培育只是指传代进程。

二：传代细胞培育原理

细胞在培育瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能持续成长，同时也将细胞数量扩展，就必须进行传代（再培育）。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才干分瓶。

三：传代细胞培育过程

1、复苏 

（1）取适量培育液参加离心管中；

（2）将冻存的细胞在37℃水浴中快速使其消融；

（3）将细胞吸入离心管中，1000rpm/min离心5 min,倒去上清液，规定参加培育液，打匀，搬运到培育瓶中，即可。

2、换液 

（1）将培育瓶中已变色的培育液倒掉；

（2）用PBS洗刷培育瓶（从没有细胞的一侧倒掉）；

（3）参加新鲜培育液，即可。

3、传代

（1）吸除培育瓶内旧培育液，参加适量PBS洗一次。

（2）向瓶内参加胰蛋白酶和EDTA混合液少量，以能覆满瓶底为限。

（3）置温箱中2~5分钟，当发现细胞质回缩，细胞空隙增大后，当即停止消化。

（4）吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升，轻轻滚动培育瓶，把残余消化液冲掉。留意加Hanks液冲刷细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失。如果细胞已脱离瓶底，则直接参加培育液停止消化。

（5）用吸管汲取培育液轻轻重复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。

（6）计数板计数后，把细胞悬液分成等份分装入数个培育瓶中，置温箱中培育。或许按照所购买公司推荐的比例传代。

4、冻存

（1）预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存预冷；

（2）将培育瓶中已变色的培育液倒掉；用适量PBS洗刷一次培育瓶； 

（3）参加胰酶，静置，待细胞将脱落时，参加适量培育液，将贴壁细胞吹落，吸入到离心管中，1000rpm/min×3min，倒掉上清液，参加1ml冻存液，轻轻吹打成细胞悬液，吸到冻存管中，密封，标记冻存细胞名称和冻存日期。

（4）放入细胞程序降温盒中，于-80℃冻存过夜。然后搬运氮中，长期保存。