当你的ELISA实验高背景……

假设您的ELISA不幸地碰到了高布景，那么也无需太忧虑，依次检查ELISA体系中的组分，并扫除可能存在的标题。记住，非特异的抗体结合会增加布景。不过，它的缺陷在于能与Protein A和IgG抗体相互作用。为了避免这一点，切勿运用过多的一抗或二抗。请勿运用高浓度（正常浓度为0.01-0.1%），它会下降特异结合，发作假阴性。这就下降了可发作信号的抗体非特异结合的时机。现在主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。您当然也期望抗体只与目的蛋白结合吧。假设您一向被布景标题所困扰，那么也许您该花些时刻来优化封闭液。
假设布景过高，而您置疑洗刷不行时，能够测验增加洗刷次数。这种封闭液廉价、不乱，在去除洗刷过程中的一些非特异结合上很有用。假设浓渡过高，或许未精确稀释，则会导致高布景。常用的蛋白封闭液包含牛血清白蛋白（BSA）、脱脂奶粉、正常血清和鱼明胶。封闭液的作用是让不相关的蛋白占有微孔板中潜伏的结合位点。
ELISA试验的原理如同很俭朴，不过乎固定抗原，增加一抗、二抗和底物，间中夹杂着洗刷和封闭。假设您的布景过高，置疑封闭不充分，那么您能够测验运用更高浓度的封闭液，或恰当延伸封闭时刻。血清组分的内在多样性可使它有用阻拦许多不同类型的分子相互作用。另一个选择是运用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液，后者可帮忙洗刷过程中的封闭。处理这个标题的一种办法是运用鸡或鱼的正常血清。好的封闭液应下降非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发作相互作用。在试验结束时，咱们是否能获得有意义的信息，这在很大程度上取决于成果的信噪比。