ELISA中抗原与抗体的影响因素

抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。小分子化合物在与大分子蛋白质结合后能引起机体产生特异性抗体的，称为半抗原（hapten）。抗原进入机体后，可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫。例如某些激素、药物等。能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于5000的蛋白质。ELISA是一种免疫测定。一个抗原分子可带有不同的决定簇。在免疫测定中，抗原是指能与抗体结合的物质。在临床检修中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。抗原的反应性取决于抗原决定簇（antigenic determinant），或称为表位（epitope）。免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法。
IgG和IgM的重链分别称为γ（gamma）链和μ（mu）链。抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig的轻链是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda）两种型别。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE.与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM.Ig由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。五类Ig的重链结构不同，这决定了它们的抗原性也不同。IgG的结构见图。
IgG可被木瓜蛋白酶分解为三个区段，其中两个相同的区段称抗原结合片断（Fab）。两者构成抗体的抗原结合部位，只与相应的抗原决定簇匹配，发生特异性结合，是抗体专一性结合抗原的结构基础。每个Fab都保留结合抗原的能力，但只有一个抗原结合位点，是单价的，与抗原结合后不泛起凝集或沉淀。另一区段称Fc段，无抗体活性，但具有IgG特有的抗原性。重链和轻链的N真个氨基酸排列顺序因各种抗体而异，称为可变区，分别用VH和VL表示。
如将多种抗原或含有多个抗原决定簇的抗原注入机体，则将由多系的B细胞产生相应的多种抗体，这些抗体均存在于免疫血清中。含有抗体的血清称为抗血清。免疫测定中所用的抗血清一般用抗原免疫兔、羊或马制得。将免疫的脾细胞（含产生抗体的B细胞）与小鼠肿瘤细胞融合，分离杂交瘤细胞，接种于小鼠腹腔，产生的腹水中含有浓度很高的单克隆抗体。每一系B细胞只产生针对某一抗原决定簇的抗体。单克隆抗体通常用抗原免疫小鼠制备。产生抗体的B细胞可在体外与繁殖力强的肿瘤细胞融合成杂交瘤细胞。将单个杂交瘤细胞分离，在体内或体外培养而分泌的抗体单克隆抗体。单克隆抗体仅针对一种抗原决定簇，具有很高的特异性。