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晶抗生物关于悬浮细胞培养的操作步骤与注意事项
人阅读 发布时间：2024-01-22 09:24
悬浮细胞培养指的是一种在受到不断搅动或摇动的液体培养基里，培养单细胞及小细胞团的组织培养系统，下面一起来了解一下悬浮细胞培养的操作步骤与注意事项。
一、悬浮细胞培步骤
1. 将准备好的冻存细胞放入37℃水浴中解冻。
2. 用70%乙醇对顶端进行消毒，用吸管将细胞转移到含有5mlwan全MEM-10培养基的25cm2组织培养瓶中，轻轻摇动培养瓶，使细胞均匀分布于培养瓶中，放入5%CO2加湿培养箱中37℃培养过夜。
3. 将培养基吸出，用0.5ml37℃的胰酶/EDTA覆盖细胞，消化30~40s。
4. 加入10ml旋转瓶wan全培养基-5，并将细胞转移至50ml的离心管中。室温1800g离心5min，弃上清。
5. 将细胞沉淀悬浮在5ml的旋转瓶wan全培养基-5中，上下吹打，将细胞团打散。
6. 在100ml或200ml通气旋转瓶中加入50ml旋转瓶wan全培养基-5，并将细胞悬液转移到瓶中。
7. 取出1ml细胞悬液，用血细胞计数器进行细胞计数。加入适量的旋转瓶wan全培养基-5，使细胞密度为（3~4）×105细胞/ml。将细胞放入无CO2培养箱，37℃旋转培养。
8. 随后的两天让细胞继续生长，并且每天对细胞进行计数，加入适量的旋转瓶wan全培养基-5以维持（3~4）×105细胞/ml的细胞密度。
9. 取1ml的细胞悬液，用血细胞计数器对细胞进行监测。
10. 当细胞密度达到（4~5）×105细胞/ml时，隔天或每天用培养基将细胞稀释至1.5×105或2.5×105细胞/ml。
11. 分别将装有50ml或100ml细胞悬液的100ml或200ml通气旋转瓶放入37℃无CO2培养箱旋转培养。每天或隔天传代。
悬浮细胞培养注意事项:
1.良好的无菌操作:悬浮细胞容易被外界污染，因此进行悬浮细胞培养前，--定要保证无菌操作的严格。使用消毒剂清洁工作区域和器.
2.细胞密度的调整:细胞密度的过低可能导致细胞生长缓慢，而过高则可能导致细胞的死亡或分化。因此，选择适当的细胞密度进行调整很重要，可以通过显微镜或细胞计数仪进行测量。
3.培养基的选择:悬浮细胞培养所使用的培养基应该与细胞类型相匹配，以确保细胞在培养中获得足够的养分和生长因子。
以上是晶抗生物关于悬浮细胞培养的操作步骤与注意事项上海晶抗生物工程有限公司的产品与完善的服务，科研新老客户一向信赖我司，十分感谢广大客户的支持与信任，我们的使命是为用户和合作伙伴开发先进的技术和成本效益的研究工具。
一、悬浮细胞培步骤
1. 将准备好的冻存细胞放入37℃水浴中解冻。
2. 用70%乙醇对顶端进行消毒，用吸管将细胞转移到含有5mlwan全MEM-10培养基的25cm2组织培养瓶中，轻轻摇动培养瓶，使细胞均匀分布于培养瓶中，放入5%CO2加湿培养箱中37℃培养过夜。
3. 将培养基吸出，用0.5ml37℃的胰酶/EDTA覆盖细胞，消化30~40s。
4. 加入10ml旋转瓶wan全培养基-5，并将细胞转移至50ml的离心管中。室温1800g离心5min，弃上清。
5. 将细胞沉淀悬浮在5ml的旋转瓶wan全培养基-5中，上下吹打，将细胞团打散。
6. 在100ml或200ml通气旋转瓶中加入50ml旋转瓶wan全培养基-5，并将细胞悬液转移到瓶中。
7. 取出1ml细胞悬液，用血细胞计数器进行细胞计数。加入适量的旋转瓶wan全培养基-5，使细胞密度为（3~4）×105细胞/ml。将细胞放入无CO2培养箱，37℃旋转培养。
8. 随后的两天让细胞继续生长，并且每天对细胞进行计数，加入适量的旋转瓶wan全培养基-5以维持（3~4）×105细胞/ml的细胞密度。
9. 取1ml的细胞悬液，用血细胞计数器对细胞进行监测。
10. 当细胞密度达到（4~5）×105细胞/ml时，隔天或每天用培养基将细胞稀释至1.5×105或2.5×105细胞/ml。
11. 分别将装有50ml或100ml细胞悬液的100ml或200ml通气旋转瓶放入37℃无CO2培养箱旋转培养。每天或隔天传代。
悬浮细胞培养注意事项:
1.良好的无菌操作:悬浮细胞容易被外界污染，因此进行悬浮细胞培养前，--定要保证无菌操作的严格。使用消毒剂清洁工作区域和器.
2.细胞密度的调整:细胞密度的过低可能导致细胞生长缓慢，而过高则可能导致细胞的死亡或分化。因此，选择适当的细胞密度进行调整很重要，可以通过显微镜或细胞计数仪进行测量。
3.培养基的选择:悬浮细胞培养所使用的培养基应该与细胞类型相匹配，以确保细胞在培养中获得足够的养分和生长因子。
以上是晶抗生物关于悬浮细胞培养的操作步骤与注意事项上海晶抗生物工程有限公司的产品与完善的服务，科研新老客户一向信赖我司，十分感谢广大客户的支持与信任，我们的使命是为用户和合作伙伴开发先进的技术和成本效益的研究工具。
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