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上海晶抗生物为您解决ELISA试剂盒数据篇标准曲线不佳的相关问题
人阅读 发布时间：2023-05-03 17:04
ELISA试剂盒实验加入显色底物后，标准品有颜色，但结果分析发现标准品最高点吸光值偏低或偏高、标准曲线无梯度等等，总结如下原因：
一、标准曲线最高点吸光值偏高，超出仪器检测范围
ELISA标准曲线最高点的吸光值一般在3.0以下，若太高超出仪器检测范围，显示OVER FLOW，可能原因：
序号可能原因解决方法
1 如OD绝对值靠谱，则显色过度TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断， 当S1，S2深蓝色，有明显梯度，S5有淡蓝色时即可终止。
2 仅作单波长检测 由于参考波长读取非特异性检测，如指纹、划痕、水渍等， 对结果也有影响。建议最终结果以双波长为最准确。
二、标准曲线最高点吸光值偏低
ELISA标准曲线最高点的吸光值一般要在0.8以上，若小于0.8，可能的原因：
序号 可能原因 解决方法
1 粉末标准品未充分溶解粉末标准品按说明书加一定体积的液体后，轻柔混匀， 室温静置30分钟，充分溶解。
2 标准品反复冻融标准品反复冻融后活性降低。
3 孵育温度、时间按说明书要求孵育条件进行孵育。
4 显色时间控制TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断，当S1，S2深蓝色，有明显梯度，S5有淡蓝色时即可终止。
三、标准曲线无梯度
ELISA实验中标准品2倍倍比稀释，但结果分析标准曲线没有梯度，可能的原因：
序号可能原因 解决方法
1 样品或标准品污染 避免污染
2 错误的样品或标准品的稀释完全按照说明书稀释
3 偶联抗体浓度过高 按照说明书调整到最佳的浓度
4 TMB底物孵育时间过长 调整到合适的孵育时间
5 错误的孵育时间或温度 完全按照说明书
6 孵育时未加盖导致溶液挥发和污染贴封片或加盖
总结
得到完美ELISA试剂盒标准曲线，需要注意几点：
1、 充分溶解标准品；
2、 标准品避免反复冻融；
3、 梯度稀释标准品注意混匀。
一、标准曲线最高点吸光值偏高，超出仪器检测范围
ELISA标准曲线最高点的吸光值一般在3.0以下，若太高超出仪器检测范围，显示OVER FLOW，可能原因：
序号可能原因解决方法
1 如OD绝对值靠谱，则显色过度TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断， 当S1，S2深蓝色，有明显梯度，S5有淡蓝色时即可终止。
2 仅作单波长检测 由于参考波长读取非特异性检测，如指纹、划痕、水渍等， 对结果也有影响。建议最终结果以双波长为最准确。
二、标准曲线最高点吸光值偏低
ELISA标准曲线最高点的吸光值一般要在0.8以上，若小于0.8，可能的原因：
序号 可能原因 解决方法
1 粉末标准品未充分溶解粉末标准品按说明书加一定体积的液体后，轻柔混匀， 室温静置30分钟，充分溶解。
2 标准品反复冻融标准品反复冻融后活性降低。
3 孵育温度、时间按说明书要求孵育条件进行孵育。
4 显色时间控制TMB显色体系中建议根据S1，S2颜色进行判断，当S1，S2深蓝色，有明显梯度，S5有淡蓝色时即可终止。
三、标准曲线无梯度
ELISA实验中标准品2倍倍比稀释，但结果分析标准曲线没有梯度，可能的原因：
序号可能原因 解决方法
1 样品或标准品污染 避免污染
2 错误的样品或标准品的稀释完全按照说明书稀释
3 偶联抗体浓度过高 按照说明书调整到最佳的浓度
4 TMB底物孵育时间过长 调整到合适的孵育时间
5 错误的孵育时间或温度 完全按照说明书
6 孵育时未加盖导致溶液挥发和污染贴封片或加盖
总结
得到完美ELISA试剂盒标准曲线，需要注意几点：
1、 充分溶解标准品；
2、 标准品避免反复冻融；
3、 梯度稀释标准品注意混匀。
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