ELISA试剂常见类型 双抗夹心法，你要的都在这里！

免疫吸附分析 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA是以体外抗原抗体反应为基础，将抗原抗体特异性反应与酶的高效催化作用相结合的一种检测方法，灵敏度可达皮克(pg/mL)水平。它是目前商业应用最为成熟的免疫分析方法之一，在医学实验、临床诊断、生物制药方面的运用也极为广泛。目前，常见的ELISA类型有四种：双抗夹心法、直接法、间接法和竞争法。
其中，双抗夹心法是最为常用的一种，分双抗体夹心和双抗原夹心。下面晶抗生物将以双抗体夹心法为例，和大家分享相关知识~
实验原理：
双抗体夹心法，其基本原理是将定量的包被抗体以物理吸附的方法固定于微孔板表面，然后加入待检标本，通过加入检测抗体，酶标记第二抗体后用TMB底物显色，微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈正相关。
1 包被抗体：
许多物质可作为固相载体，、、聚丙酰胺和纤维素等，在进行抗体固定化之前，需要对酶标板材进行筛选。酶标板由亲水到疏水，对蛋白的结合会由强变弱，造成吸附能力的差异。将抗体吸附在固相载体表面时，要求纯度要好，吸附时一般要求pH在9.0～9.6之间。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：用不同的蛋白质浓度包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本OD值，选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。
2 标准品及样本
标准品即为目标物（样本中待检测因子）的纯蛋白，从母液稀释到级联稀释都需要特别留意，标曲的制作是ELISA试剂实验成功的关键。待检目标物需具备多个抗原表位，即二价或二价以上的大分子抗原，因为这种检测方法需要两种抗体。另外，需要注意的是血清样本中的类风湿因子（RF）干扰——RF能与多种动物的变性IgG的Fc部分结合而产生假阳性反应。
3 洗涤液：
ELISA试剂操作中会涉及到多次洗板。长时间的孵育后，会出现非特异性结合，这时就需要洗涤液来洗去非特异性结合的蛋白或抗体，通常为PBS，洗4-6次，每次30s左右。多次短时间洗板比少次长时间洗板更有效，在最后一次洗板时，尽量拍净液体，同时注意让板子保持湿润。
4 检测抗体：
双抗体夹心法中的检测抗体与目标蛋白结合位点需要有别于目标物与包被抗体结合的位点，即会涉及抗体配对的问题。常用的抗体配对方法有下几种：
包被抗体为单抗，检测抗体为多抗；
包被抗体为单抗，检测抗体为单抗，但这两种单抗针对的抗原表位不同；
包被抗体为多抗，检测抗体为多抗，这两种多抗一般来源于不同的宿主。
以上是上海晶抗生物ELISA试剂常见类型 双抗夹心法，详细介绍，望对您的科研事业提供帮助！