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讲解ELISA试剂盒实验测定标本的分解
人阅读 发布时间：2021-12-03 09:45
正确实验我们才可以得到有效的数据，要是操作错误不仅会得到的数据不准，还浪费我们时间。下面给大家讲解一下ELISA试剂盒实验测定标本的分解。
一、标本保存不当
血清中IgG可聚合成多聚体、AFP可形成二聚体，在间接法测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性；标本放置时间过长（如一天以上），有时抗原或抗体免疫活性减弱，亦可出现假阴性。为克服上述干扰，ELISA测定的宜为新鲜采集；如不能立即测定，5天内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的应低温冻存；冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。
二、标本凝集不全
在没有促凝剂和抗凝剂存在的情况下，正常血液采集后1/2~2h开始凝固，18~24h完全凝固。有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，此时的血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；这类情况于次日复查时因血凝已完全，血清中不再有纤维蛋白原存在，故复查结果变为阴性。为避免上述干扰作用，解决的办法是血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。
三、标本溶血
由于各种人为原因引起的，均可因红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白，在以辣根过氧化物酶为标记的，会导致非特异性显色，干扰测定结果。为克服上述干扰作用，标本采集时必须注意避免溶血。
四、标本受细菌污染
因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。
五、标本管中添加物质的影响
抗凝剂（如肝素，EDTA）、酶抑制剂（如NaN3可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性）及快速分离血清的分离胶有一定干扰作用。
通过以上的分析和总结，排除ELISA试剂盒因素和操作因素，再有就是从标本因素进行分析，并应采取相应措施排除干扰，从而确保检测的结果.
一、标本保存不当
血清中IgG可聚合成多聚体、AFP可形成二聚体，在间接法测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性；标本放置时间过长（如一天以上），有时抗原或抗体免疫活性减弱，亦可出现假阴性。为克服上述干扰，ELISA测定的宜为新鲜采集；如不能立即测定，5天内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的应低温冻存；冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。
二、标本凝集不全
在没有促凝剂和抗凝剂存在的情况下，正常血液采集后1/2~2h开始凝固，18~24h完全凝固。有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，此时的血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；这类情况于次日复查时因血凝已完全，血清中不再有纤维蛋白原存在，故复查结果变为阴性。为避免上述干扰作用，解决的办法是血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。
三、标本溶血
由于各种人为原因引起的，均可因红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白，在以辣根过氧化物酶为标记的，会导致非特异性显色，干扰测定结果。为克服上述干扰作用，标本采集时必须注意避免溶血。
四、标本受细菌污染
因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。
五、标本管中添加物质的影响
抗凝剂（如肝素，EDTA）、酶抑制剂（如NaN3可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性）及快速分离血清的分离胶有一定干扰作用。
通过以上的分析和总结，排除ELISA试剂盒因素和操作因素，再有就是从标本因素进行分析，并应采取相应措施排除干扰，从而确保检测的结果.
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