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判定ELISA试剂盒实验结果常用方法

人阅读 发布时间:2021-07-05 08:55

ELISA试剂盒实验现已普遍运用于科研领域,其实验原理:用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗C3抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗C3抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的C3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

当我们将实验的一切都准备好并且即将完毕时,要如何去判定ELISA试剂盒实验结果呢?这里给您总结出了三个方法,分别是定量测定、半定量测定、定性测定,下面就来看看吧。

1、定量测定:用己知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定,与待测标本同时进行测定,绘制标准曲线,结果以量或活性单位表示之。

2、半定量测定:结果一般以滴度表示。将标本连续稀释后,进行ELISA检测,在阳性临界值以上的zui高稀释度即为该标本的“滴度”。

3、定性测定

(1)阳性判定值法(cut-off value,CO值):一般为阴性对照的平均A值加一个常数,试剂制备严格标准化,要先计算出阳性对照A值平均数和阴性对照A值平均数。标本A值≥CO值即为阳性。

(2)抑制率法:在竞争抑制法中+结果可用抑制率表示。抑制率(%)=(A阴性对照A- A待测)/阴性对照X100%,一般以抑制率≥50%为阳性。

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