I、Elisa试剂盒过程：
一、固定：
PBS 5min×3次 振荡洗刷制作好的细胞爬片。固定液掩盖细胞，RT 静置15min。PBS 5min×3次 振荡洗刷。

二、通透化：
通透液掩盖细胞，RT 静置30min。PBS 5min×3次 振荡洗刷。

三、封闭：
封闭液掩盖标本表面37℃孵育1h。

四、一抗孵育：
一抗以适宜浓度稀释PBS，掩盖标本表面。4℃孵育过夜，第二天37℃复温1h。PBS 5min×3次 振荡洗刷。

五、TSZ Elisa试剂盒二抗孵育：

fitC符号二抗以适宜浓度稀释于PBS，掩盖标本表面。37℃避光孵育<60min。PBS 5min×3次 避光 振荡洗刷。

六、染核：
新鲜稀释Hoechst掩盖细胞表面，RT避光静置<10min。PBS 5min×3次 避光 振荡洗刷。

七、封片：
在洁净的载玻片上滴一滴封片剂，将爬片的细胞面扣在封片剂上。

八、镜检，4℃避光保存。

II、注：

1、细胞密度要适宜，状态较好。

2、从孵育二抗开始要避光(封闭室内日光灯即可)。

3、完成后及时镜检，照相;分别用不同波长激起荧光，在Photoshop软件下组成一张图。

III、试剂制造：

1、通透液：0.5 %(v/v)TritonX-100/PBS

2、封闭液：正常山羊血清稀释于PBS;或商品化封闭液制品。

3、Hoechst：Hoechst33258即可。

4、TSZ Elisa试剂盒封片剂：50%(v/v)甘油/PBS。