上海晶抗生物工程有限公司

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Elisa试剂盒在细胞免疫荧光中的应用

发布时间:2020-05-07 08:44 |  点击次数:

I、Elisa试剂盒过程:
一、固定:
PBS 5min×3次 振荡洗刷制作好的细胞爬片。固定液掩盖细胞,RT 静置15min。PBS 5min×3次 振荡洗刷。

二、通透化:
通透液掩盖细胞,RT 静置30min。PBS 5min×3次 振荡洗刷。

三、封闭:
封闭液掩盖标本表面37℃孵育1h。

四、一抗孵育:
一抗以适宜浓度稀释PBS,掩盖标本表面。4℃孵育过夜,第二天37℃复温1h。PBS 5min×3次 振荡洗刷。

五、TSZ Elisa试剂盒二抗孵育:

fitC符号二抗以适宜浓度稀释于PBS,掩盖标本表面。37℃避光孵育<60min。PBS 5min×3次 避光 振荡洗刷。

六、染核:
新鲜稀释Hoechst掩盖细胞表面,RT避光静置<10min。PBS 5min×3次 避光 振荡洗刷。

七、封片:
在洁净的载玻片上滴一滴封片剂,将爬片的细胞面扣在封片剂上。

八、镜检,4℃避光保存。

II、注:

1、细胞密度要适宜,状态较好。

2、从孵育二抗开始要避光(封闭室内日光灯即可)。

3、完成后及时镜检,照相;分别用不同波长激起荧光,在Photoshop软件下组成一张图。

III、试剂制造:

1、通透液:0.5 %(v/v)TritonX-100/PBS

2、封闭液:正常山羊血清稀释于PBS;或商品化封闭液制品。

3、Hoechst:Hoechst33258即可。

4、TSZ Elisa试剂盒封片剂:50%(v/v)甘油/PBS。