一、ELISA试剂盒标本的采取和保存
可用作elisa测定的标本非常广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其间某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本。除特殊情况外,在医学查验中均以血清作为检测标本。
二、试剂的预备
按试剂盒说明书的要求预备实验中需用的试剂。ELISA顶用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗刷的,应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液使用pH计测量较正。从冰箱中取出的实验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次实验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
三、ELISA试剂盒加样
在ELISA中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部,防止加在孔壁上部,并注意不可溅起,不可产生气泡。 加标本一般用微量加样器,按规定的量参加板孔中。每次加标本应更换吸嘴,以免发生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定(如间接法ELISA)需用稀释的血清,可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中参加稀释液,再在其间参加血清标本,然后在微型震动器上震动1分钟以确保混和。加酶结合物使用液和底物使用液时可用定量多道加液器,使加液进程迅速完结。