科研ELISA试剂盒试验中,布景深,悉数呈有色(一般的Elisa布景值OD<0.2)依据技能剖析,可能存在的原因有以下几条:
1、样品稀释液污染
解决办法:弃去稀释液,重新配置
2、吸头重复使用,未洗净或消毒不彻底
解决办法:吸头尽可能一次性使用
3、不正确的孵育时刻,温度(尤其是底物孵育的时刻)
解决办法:zui为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。彻底依照说明书要求
4、偶联抗体(streptavidin-HRP)浓度过高
解决办法:依照说明书调整到适宜的浓度
5、ELISA板子不正确的贮存
解决办法:酶标板贮存于2-8 ℃;使用结合力低点的Elisa板
6、试验过程中洗刷不充沛,洗后未拍干,样品中其它成分残留或酶符号物残留
解决办法:洗液精确配制;充沛洗刷,静置15秒,彻底拍干。加样或加酶决定的滤纸应弃去不必,不要反复使用,否则易形成污染。
7、底物污染,未避光保存,呈现颜色
解决办法:弃去底物,重新配置
8、没有正确封闭
解决办法:在规范品稀释液中加入动物蛋白或延伸封闭时刻
9、样本溶血严峻
解决办法:主张使用非溶血或细微溶血样本,严峻溶血样本会导致布景偏高。