ELISA试剂盒的测定方法及要求！！！

科研试验中要使ELISA试剂盒测定得到精确的成果，不论是定性的仍是定量的，必须严厉按照规则的方法制备试剂和施行测定。一般性试剂，如包被缓冲液、洗刷液、标本稀释液、结合物稀释液、底物工作液和酶反响终止液等，制造时不可漫不经心。
 
(一)加样 

在ELISA试剂盒中除了包被外，一般需进行45加样。在定性测定中有时不强调加样量的精确性，例如规则为加样一滴。此时应该运用相同口径的滴管，保持精确的加样姿势，使每滴液体的体积基本相同。在定量测定中则加样量应力求精确。标本和结合物的稀释液应按规则制造。加样时应将液体加在孔底，防止加在孔壁上部，并注意不可出现气泡。
 
(二)保温 

在ELISA试剂盒中一般有二次抗原抗体反响，即加标本后和加结合物后，此时反响的温度和时刻应按规则的要求，保温容器zui好是水浴箱，可使温度迅速平衡。各ELISA板不应叠在一起。为防止蒸腾，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿纱布的湿盒中。湿盒应该是金属的，传热简单。如用保温箱，空湿盒应预先放在其间，以平衡温度，这在室温较低时更为重要。参加底物后，反响的时刻和温度通常不做严厉要求。如室温高于20℃，ELISA板可避光放在试验台上，以便不时调查，待对看管显色适其时，即可终止酶反响
 
(三)洗刷 

洗刷在ELISA试剂盒进程中不是反响聚，但却是决定试验成败的关键。洗刷的意图是洗去反响液中没有与固相抗原或抗体结合的物质以及在反响进程中非特异性吸附于固相载体的搅扰物质。因此在ELISA试剂盒测定的反响进程中应尽量防止非特异性吸附，而在洗刷时又应把这种非特异性吸附的搅扰物质洗刷下来。在标本和结合物的稀释液和洗刷液中参加聚山梨酯一类物质即右达到此意图。
 
ELISA板的洗刷一般可采用以下方法：

①吸干孔内反响液;

②将洗刷液注满板孔;

③放置2min，略作摇摆;

④吸干孔内液，也可倾去液体后在吸水纸上拍干。洗刷的次数一般为3～4次，有时乃至需洗5～6次。
 
(四)比色 

如阴性对照色彩极浅，在定性测定中一般可采用目视比色。如用比色计测定成果，精确性决定于ELISA板底的平整与透明度和比色计的质量。