一、外观;拿到血清,最先触摸的是血清外观,对于短少细胞培养经历的人来说,外观的判断尤为重要
1、色彩
根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或赤色,我国的细胞培养用血清规范是不高于20mg/dl,实际上,血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响,这个目标的意义在于能体现出采血进程的严谨规范程度,良好的操作能下降血清的溶血。
国产血清的采血点很分散,大多是由屠户采血后立刻离心搜集,所以很少会有溶血,表现出亮堂的蜡黄色,当然,国产血清也很少有规范意义上的胎牛血清。进口胎牛血清或多或少总有点溶血,由于真实的胎牛血清凝血功能差,红细胞简单破裂。
总的来说,国产的血清呈现出蜡黄。进口的血清,质量最好的呈现出谈黄、微赤色,如Gibco 16000,差点的呈现出橘赤色或鲜赤色。当然,热灭活血清或保存不妥的血清,由于血红蛋白的损坏氧化,会呈现出暗红,甚至咖啡色。
2、沉积
许多血清客户,会发现进口血清有沉积,从而怀疑血清的质量问题,这是没有根据的。
血清中的沉积是由纤维蛋白的凝聚发生,对血清质量没有任何影响,沉积的发生原因许多,和厂家的加工出产方式密切相关。
国产的血清,大多来自北方,由于价格低廉,保存环境都不好,从采血、冷冻、运输到出产会经过多次冻融,每次冻融进程,就会分出部分纤维蛋白沉积,这样,血清制品过滤后看起来反而愈加的“干净”,很少有沉积发生。
进口的胎牛血清,过滤分装前很少会重复冻融,出产后的制品也是清澈的,但随着时间的推移,血清中的大量纤维蛋白会分出构成沉积。当然,进口的重生牛血清,一般牛龄都在2周左右,血清中的各种蛋白含量显着偏高,出产后血清或许会污浊,甚至有大量沉积。
当然,购买回来的血清都是冰冻状态,使用时需要融化,融化进程最好在温度较低的状态下渐渐进行,否则沉积相对较多,尽管沉积并不直接影响血清的质量,但对细胞的显微观察有必定的阻碍。
3、弄清度
进口胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低,表现为稀薄、清淡,而国产血清,由于绝大多数是重生牛血清,相对而言愈加粘稠,色彩略深,这对于开始触摸血清的人很难判断,但把两者进行对比,可简单分辩。
二、主要技术目标
目前国内血清的质量规范是2005版的《中华人民共和国药典》,主要目标有以下几点:
1、内毒素
规范为不高于5EU/ml。内毒素是细菌破碎后细胞壁的成分,因此内毒素含量的高低可表现出采血到出产一系列进程中的无菌操作状况。目前,国产血清根本都能到达这一要求,许多进口胎牛血清内毒素含量反而更高,如Gibco 26140,只要求不高于50EU/ml,高出我国规范10倍,即使是16000,也要10EU/ml,血清质量也未见影响。可见,内毒素含量偏高不影响质量,除非含量极高,预示着现已污染。
2、总蛋白含量
胎牛血清一般范围是30-40mg/ml,数值偏高,阐明采血的牛龄偏大,不是胎牛,数值偏低,标明血清或许掺水了。
3、血红蛋白
规范为不高于20mg/dl,色彩越红,数值越高,反之,数值越低。
4、pH
国产血清,大多高于7.5,进口胎牛血清,大多低于7.5,详细原因未知,或许和牛龄有关,这也能用来开始辨别血清的来源。
5、微生物
包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性病毒等。随着国内血清厂家出产条件的改进提高,细菌、霉菌等“大型”微生物简直能100%操控,支原体经过0.1um过滤,大多也能清除。大肠杆菌噬菌体的污染还是比较严重的,主要是出产环境进程中带入,又无法过滤,很难彻底清除,但对血清质量影响不大。病原性病毒,特别是BVDV,在国产血清中简直90%以上都存在,这类微生物是影响国产血清质量的重要要素之一,而进口胎牛血清中根本都操控的很好。
6、免疫球蛋白
国产血清的只是定性检测,成果也很不准确,进口胎牛血清大多定量检测。免疫球蛋白的数值能完全体现出采血的时的牛龄状况,国产血清,根本都是重生牛的,血清中简单发生IgM,IgG的含量也偏高,进口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也较低。