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关于细胞铺板试验操作技巧,请收好了!

发布时间:2020-06-02 10:45 |  点击次数:

做细胞生物学试验,细胞铺板大概是常见的一个试验。但是有很多人不是很得办法,铺得不是很均匀:要么中心密周围稀,要么周围密中心秃顶。怎么办呢?以下来自术人员具体解析,请收好了!

一般 96 孔板,每孔是加 100 微升细胞悬液,从孔的左面接近底部参加,加完半边板后,将未加的细胞悬液混一下再继续加剩下的半边板子,都加完后盖上盖子,左手悄悄扶住板的左面,右手悄悄敲击板的右边际,注意把握力度(我一般轻巧敲三下),太强或次数太多会导致细胞会集成堆,将板顺时针旋转(逆时针效果不好),依次敲击剩下三个边,静置约 5 分钟,放入 37 度培育箱。

6 孔板、12 孔板或 24 孔板,均可选用将个孔参加少数无血清培育基,晃动滋润整个孔底,然后用移液枪吸至第二孔,相同办法滋润孔底,其它孔一次类推,这样整个孔底都是湿润的,细胞悬液会平铺在整个孔底,加细胞悬液的时分能够避免加在中心,中心细胞多,而加在周边晃匀后会呈现周边细胞多中心少的现象,细胞涣散较均匀,注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。

细胞悬液加完后,将细胞培育板抬高,对着灯光,从底部往上看,看细胞有没有抱团。然后从底部敲击,使之涣散。假如试验室有平板振荡器的话,建议用这个仪器稍振荡一下,效果不错,振幅小,频率高。

细胞要尽量打散,大部分呈单个状态。离心后,要充沛悬浮。还有转移到六孔板后,需求晃动,晃的时分最好不要让细胞液转圈,不然细胞就全被带到中心去了,就会不均匀。

一瓶细胞长满后,正常处理,在培育瓶里吹匀,然后铺 6 孔板,每孔 2 毫升,铺完之后不必调查直接用酒精棉擦拭,然后放到培育箱里,轻微的左右前后各三圈。基本上 24 小时之后再调查,每孔的细胞都会很均匀。

计算好所需求的悉数液体量和细胞量,混匀后,加到六孔板里,六孔板按横 8 字型晃,显微镜下调查,假如不均匀,按上述办法再晃。假如细胞未计数直接种的话,在种六孔板的过程中,随时晃一下混匀用的瓶子。 

放在水平板面上先上下移动,再左右移动,每个方向 5 到 6 次,但要害的是摇晃后最好直接放入培育箱中,不要再做过多的运动,例如放到镜下去看,不然很简单就又聚到中心去了。